SARS-CoV / SARS-CoV-2 Main Protease 活性測定用蛍光基質 2020/06/16
このたび、SARS-CoV main protease(SARS-CoV Mproまたは3CLpro)・SARS-CoV-2 main protease(SARS-CoV-2 Mpro)の基質3種類を販売いたします。メインプロテアーゼが基質を切断することによって増加する蛍光を観測することで、プロテアーゼ活性を測定することができます。阻害剤探索研究などにお役立てください。
Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2(SARS-CoV-2)は、2019年末から、世界中で感染が広がっている新型コロナ感染症(COVID-19)の原因ウイルスです。ウイルスが宿主細胞に感染すると、ウイルス由来のRNAから巨大な前駆体タンパクが翻訳されます。その前駆体タンパクは種々のプロテアーゼによって切断され、例えばRNA依存的RNAポリメラーゼなどのウイルスの増殖に必要な機能タンパクとなります。SARS-CoV-2 Mproは切断産物の一つでもありますが、前駆体タンパク切断の主要な役割を担っており、ウイルスの増殖に必要不可欠なプロテアーゼです。従って、この「メインプロテアーゼ」の阻害剤は抗ウイルス薬となる可能性があり、世界中で開発が進められています。
Dabcyl-Lys-Thr-Ser-Ala-Val-Leu-Gln-Ser-Gly-Phe-Arg-Lys-Met-Glu(Edans)-NH2
SARS-CoV / SARS-CoV-2 MproのFRETを利用した消光性蛍光基質です1),2),3)。前駆体タンパクの配列Thr-Ser-Ala-Val-Leu-Gln↓Ser-Gly-Phe-Arg-Lys-Met [↓が切断部位] に蛍光基(Edans基)と消光基(Dabcyl基)を導入しています。SARS-CoV Mproが蛍光基と消光基間のGln-Ser配列を切断すると、蛍光が増大します。この蛍光を観測することにより、プロテアーゼ活性を測ることができます [KM=17μM、kcat=1.9s-1 (SARS-CoV Mproに対する速度論的パラメータ)]1) [KM=33μM (SARS-CoV-2 Mproに対する速度論的パラメータ)]3)。
図1. FRETを利用したSARS-CoV/SARS-CoV-2 Mpro消光性蛍光基質のプロテアーゼ活性測定方法
Code | 品名 | 容量 | 価格 |
3249-v | Dabcyl-Lys-Thr-Ser-Ala-Val-Leu-Gln-Ser-Gly-Phe-Arg-Lys-Met-Glu(Edans)-NH2 | 1 mg | 50,000 |
Ac-Abu-Tle-Leu-Gln-MCA・Ac-Thz-Tle-Leu-Gln-MCA
Dragらにより報告された、SARS-CoV-2 Mproへの親和性の高い2つの配列4)にアミノメチルクマリン(AMC)を導入した、4-メチルクマリン-7-アミド(MCA)タイプの蛍光基質です。非蛍光物質であるMCA基質が、SARS-CoV-2 Mproにより切断されると、強い蛍光をもつAMCが遊離します。この蛍光を観測することにより、プロテアーゼ活性を測ることができます。(Ex: 380nm / Em: 460nm)
Code | 品名 | 容量 | 価格 |
3250-v | Ac-Abu-Tle-Leu-Gln-MCA | 1 mg | 10,000 |
3251-v | Ac-Thz-Tle-Leu-Gln-MCA | 1 mg | 10,000 |
その他のCoV関連製品
Code | 品名 | 容量 | 価格 |
3252-v | Z-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly-MCA (Substrate for PLPro) | 1 mg | 10,000 |
3206-v | Ubiquitin-MCA (Substrate for PLPro) | 50 μg | 20,000 |
3155-v | Boc-Arg-Val-Arg-Arg-MCA (Substrate for Furin) | 5 mg | 6,300 |
3159-v | Pyr-Arg-Thr-Lys-Arg-MCA (Substrate for Furin) | 5 mg | 6,500 |
3099-v | AMC (Reference Compound) | 5 mg | 2,000 |
3253-v | Ac-Abu-D-Tyr-Leu-Gln-VS (Inhibitor for Mpro) | 1 mg | 25,000 |
4041 | Leupeptin (Inhibitor for Serine Protease) | 25 mg | 5,700 |
4321-v | E-64-d (Inhibitor for Thiol Protease) | 5 mg | 10,000 |
- C.-J. Kuo, Y.-H. Chi, J.T.-A. Hsu, and P.-H. Liang, Biochem. Biophys. Res. Commun., 318, 862 (2004).
- L. Zhang, D. Lin, X. Sun, U. Curth, C. Drosten, L. Sauerhering, S. Becker, K. Rox, and R. Hilgenfeld, Science, 368, 409 (2020).
- C. Ma, M. D. Sacco, B. Hurst, J. A. Townsend, Y. Hu, T. Szeto, X. Zhang, B. Tarbet, M. T. Marty, Y. Chen, and J. Wang, bioRxiv2020.04.20.051581.
- W. Rut, K. Groborz, L. Zhang, X. Sun, M. Zmudzinski, R. Hilgenfeld, and M. Drag bioRxiv2020.03.07.981928.